谱聚医疗丨儿茶酚胺检测及其应用

目前儿茶酚胺的检测方法较多，如电化学分析法、化学发光法、色谱串联质谱法等。但是，生物样品中儿茶酚胺含量极微、易氧化且存在内源性干扰物，临床上尚缺乏标准化的检测方法且只能检测部分CAs。因此，临床上儿茶酚胺的检测仍然存在较多难点。经过现有CAs的临床检测方法及其优缺点的对比（见下表），液相色谱串联质谱法（LC⁃MS/MS）因为其高选择性和灵敏度成为了CAs及其代谢物检测的主流方法，并且在共识也指出建议使用LC-MS/ MS方法测定CAs及其代谢物检测。

本项目基于谱聚医疗PreMed 5200 液相色谱串联质谱系统（LC-MS/MS），建立了血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法，该方法的灵敏度、线性和精密度良好，实际测定样品的回收率情况较好，能够满足临床血浆儿茶酚胺代谢物的检测需求。

基于LC-MS/MS技术的临床样本有机小分子质谱分析

型号：PreMed 5200 浙械注准20222220115

儿茶酚胺样本萃取液（内含样本标准品、样本质控品、流动性添加剂和内标准品）来自杭州谱聚医疗科技有限公司；乙腈，为色谱纯（Fisher）；甲酸为色谱纯，来自上海安谱；

监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见下表。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。

详见杭州谱聚医疗的儿茶酚胺检测试剂说明书。

MN样本：50-2000pg/mL范围内；NMN样本将50-2000pg/mL范围内；3MT样本将12.5-500pg/mL范围内；在线性范围内所有化合物的线性相关系数R均大于0.998，表明方法线性良好，见图1、2、3。

图1  MN标准曲线

图2  NMN标准曲线

图3  3MT标准曲线

MN信噪比：17.99，见图4；根据公式S/N= 𝐻𝑚/𝑧 /𝐻噪声计算,式中 S/N -信噪比；𝐻𝑚/𝑧-子离子积分后的峰高；𝐻噪声-基线噪声，需在出峰后的 0.5min～1.0min 范围内选择。

MN检出限=17.99/（50pg/mL*25µL）=0.01/pg

图4  MN信噪比

NMN信噪比：21.69， NMN检出限=21.69/（50pg/mL*25µL）=0.02/pg

图5 NMN信噪比

3MT信噪比：11.02，见图6；3MT检出限=11.02/（12.5pg/mL*25µL）=0.04/pg

图6  3MT灵敏度

通过对质控样（QCL和QCH）进行24个重复，来评价方法的准确度。按上述条件进样分析，结果如表1所示，数据显示，所有化合物的CV在4.16-6.25%，精密度良好。

表1  MN、NMN、3MT精密度评价结果

制备标准曲线，中质控浓度、高质控浓度各8个重复，来评价方法的准确度。结果如表2所示，数据显示，质控样和实际样品测定结果的回收率在88.64-111.44 %之间，样品检测的回收率良好。

表2  MN、NMN、3MT准确度评价结果

本文基于谱聚医疗PreMed 5200 液相色谱串联质谱系统（LC-MS/MS）分析了血浆样本中儿茶酚胺代谢物的含量，结果显示灵敏度满足检测需求，方法线性和精密度良好，实际测定样品的回收率情况较好，方法能够应用于临床血浆样本中儿茶酚胺代谢物的检测。

参考文献：

1. 叶珂君, 周小琳, 欧贤红. 儿茶酚胺检测技术的研究进展[J]. 中国现代应用药学, 2022, 39(2): 253-260.

2. 中华医学会内分泌学分会肾上腺学组嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识J7.中华内分泌代谢杂志，2016，32(3):181-187.

3. 雷 迁，杨建波. 儿茶酚胺的临床检测研究进展[J]. 重庆医科大学学报, 2022,47 (8）:897-902